Tinciones Diferencial
Como su nombre lo indica, nos permite diferenciar
entre grupos de bacterias que tienen distintas propiedades tintoriales.
Las tinciones diferenciales más comúnmente
utilizadas son la tinción de Gram y la tinción de Ziehl-Neelsen.
Tinción de Gram
La tinción de Gram, fue desarrollada específicamente
por Christian Gram en 1884, a pesar del tiempo transcurrido, la tinción de Gram
apenas se ha modificado y es uno de los primeros pasos que se realiza para
cualquier identificación bacteriana.
Reactivos Colorantes
La tinción de Gram requiere 4 soluciones:
1.
Primer
Colorante: un colorante básico (+) que en contacto con las células cargadas
negativamente.
2.
Solución
Mordiente: fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las
células.
3.
Agente
Decolorante: es un disolvente orgánico; por ejemplo, Alcohol Acetona (1:2).
4. Colorante Contraste: es un colorante básico (-) de
distinto color.
Tinción Diferencial de
Gram
1.
Cubrir
el preparado con 2 gotas de cristal violeta durante 1 minuto.
2.
Lavar
cuidadosamente el preparado con agua destilada o corriente.
3.
Cubrir
el frotis con 2 gotas de Lugol de Gram durante 30 segundos.
4.
Lavar
cuidadosamente el frotis con agua.
5.
Inclinar
el portaobjetos y aplicar gota a gota el colorante dejando que escurra hasta
que no fluya la tintura.
6.
Inmediatamente
lavar con agua.
7.
Aplicar
2 gotas de Safranina.
8. Lavar preparado con agua.
Procedimiento Técnico
- Hacer un frotis.
- Secar al aire y fijar con calor.
- Cubrir todo el portaobjetos con Fucsina fenicada.
- Calentar suavemente con el mechero hasta la emisión de vapores
- El colorante no debe de secarse, ni hervir, añadir más si es necesario.
- Mantener la emisión de vapores durante 5 minutos.
- Lavar con un chorro suave de agua.
- Decolorar con Alcohol Acido.
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