Determina la capacidad
de un organismo de atacar un hidrato de carbono específico incorporado en un
medio de crecimiento básico, con producción o no de gases, junto con la determinación de posible ácido sulfhídrico.
El agar TSI es un medio diferencial que determina tanto la fermentación
de los hidratos de carbono y la producción de ácido sulfhídrico. Las bacterias
pueden utilizar cualquiera de los sustratos incorporados en el medio y ser
metabolizados, características que son utilizadas para la diferenciación de
éstas, principalmente para las Enterobacterias.
Este medio contiene lactosa con una concentración de 1% y glucosa 0.1%,
lo cual permite la observación de la fermentación de uno o de ambos
carbohidratos por parte de las bacterias, además de la producción de gas y de
ácido sulfhídrico.
La fermentación es un proceso que se lleva a cabo en condiciones
aeróbicas (pico de flauta) y anaeróbicamente (capa inferior). En el pico de
flauta la glucosa (monosacárido) es catabolizada inicialmente por medio del
ciclo anaeróbico de Embden-Meyerhof, utilizado tanto por los aerobios como por
los anaerobios para dar ácido pirúvico, y posteriormente éste será degradado a
través del ciclo de Krebs para dar CO2, H2O y energía.
Por otra parte la lactosa (disacárido) será primero degradada a sus
monosacáridos correspondientes (glucosa y galactosa).
El medio TSI contiene una cantidad limitante de glucosa y una
concentración 10 veces mayor de lactosa. Las Enterobacterias y los
fermentadores de glucosa comienzan metabolizando este azúcar, ya que las
enzimas que utilizan la glucosa están presentes como constituyentes de las
bacterias, y éstas pueden obtener mayor energía por utilización del azúcar más
simple.
Todos los otros carbohidratos deben ser convertidos en glucosa para
entrar en el ciclo de Embden-Meyerhof. La utilización de la glucosa se realiza
en forma aerobia sobre la estría, donde el oxígeno presente actúa como aceptor
terminal de electrones y en la parte terminal de la columna en condiciones de
anaerobiosis. Una vez que una bacteria fermentadora de glucosa ha reducido toda
la glucosa disponible a piruvato, comenzará a metabolizar el piruvato a través
del ciclo aeróbico de Krebs (sobre la estría), formando productos finales
ácidos. El ácido en el medio hace virar el amarillo del indicador de pH, rojo
de fenol. Entonces, luego de 6 horas de incubación, la zona de la estría y el
fondo del tubo inoculado con un fermentador de glucosa tendrán un color
amarillo. Si el microorganismo no fermenta la glucosa, el fondo permanecerá
rojo (indicando que no hay variación del pH) o se alcalinizará (lo que puede
visualizarse por un color rojo algo más intenso que del medio original),
demostrando que la bacteria no es miembro de la familia Enterobacteriaceae.
Después de haber agotado la cantidad limitada de glucosa, una bacteria
con capacidad para utilizar la lactosa o sacarosa comenzará a degradarlas. Como
el medio contiene 10 veces más lactosa que glucosa, las bacterias encontrarán
sustrato suficiente para continuar la formación de productos finales ácidos.
Luego 18 – 24 horas de incubación todo el medio TSI permanecerá de color
amarillo. Esta reacción se denomina ácido sobre ácido (A/A) y el organismo se
identifica como un fermentador de lactosa. La producción de gas provocará la
ruptura de la columna de agar o la empujará hacia la parte superior, de modo
que un fermentador de lactosa que produce gas dará una reacción A/A más gas.
Interpretación
1. Rojo en pico de flauta: alcalino; degradación aeróbica de glucosa.
Amarillo en capa profunda: ácido; degradación anaeróbica de la
glucosa.
2. Amarillo en pico: ácido Amarillo en capa profunda: ácido
3. Rojo en pico de flauta: alcalino Sin cambio de color en capa
profunda: alcalina.
4. Producción de H2S: precipitado negro
5. Producción de gases: Producción de burbujas, descomposición del
medio, ligera muesca del medio sobre el costado del tubo o desplazamiento del
medio del fondo, dejando un espacio libre.
Forma de reporte de resultados.
1. K / A (Fermentación de glucosa solamente)
2. A / A (Fermentación de glucosa y lactosa)
3. K / K (No fermentación de glucosa y lactosa).
Los resultados se escriben siempre siguiendo un patrón. Primero la
reacción del pico de flauta seguida por la reacción de la capa profunda,
separadas por una barra.
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