El citrato de sodio es una sal del ácido cítrico, un compuesto orgánico
simple que constituye uno de los metabolitos del ciclo de los ácidos
tricarboxilicos. Generalmente los microorganismos que emplean el citrato como
única fuente de carbono, utilizan sales de amonio como única fuente de
nitrógeno. El metabolismo del citrato realizado, por algunas bacterias se
realiza por el ciclo de Krebs y requiere el desdoblamiento del citrato por la
enzima citritasa (citrato-oxalacetato-liasa o citrato desmolasa) en presencia
de magnesio o manganeso y de transportadores como citrato permeasas.
La citritasa actúa sobre el citrato produciendo ácido oxalacetico y
acetato; productos que son convertidos enzimáticamente a piruvato y dióxido de
carbono. Durante esta reacción el medio comienza a alcalinizarse por el CO2 que
se genera, el cual se combina con el agua y el sodio para formar Carbonato un
producto alcalino, este carbonato da la alcalinidad que produce el cambio de
color del indicador de pH del medio de verde a azul Prusia oscuro (indicador:
azul de bromo timol, amarillo a pH< de 6.0 y azul a pH > de 7.6). El
medio incluye citrato como única fuente de carbono y fosfato de amonio como
única fuente de nitrógeno.
Técnica
Inocular el tubo con agar citrato de Simmons realizando siembra por
estría tomando una colonia del microorganismo en estudio. Incubar a 37 grados C
por 24 horas.
Interpretación
El desarrollo de un color azul intenso en 24-48 horas indica
una prueba positiva y revela que el microorganismo en estudio ha sido capaz de
utilizar el citrato en el medio con la formación de productos alcalinos. La
prueba también es positiva en ausencia de color azul si existe crecimiento del
microorganismo a lo largo de la estría de inoculación.
Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de crecer con citrato como única fuente de carbono y sales amónicas inorgánicas como única fuente de nitrógeno, provocando la alcalinización del medio.El medio a utilizar es agar Citrato de Simons, que contiene citrato de sodio, fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador de pH.
Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que, junto con el metabolismo del citrato, generará una fuerte basificación del medio que será aparente por un cambio de color del mismo de verde a azul
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