ADN Y ARN

Las actividades exonucleasas de la DNA polimerasa:

La ADN polimerasa son proteínas que además de las actividades polimerasas que poseen, tienen también actividades exonucleasas. Los ADN pol de tipo I terminán la replicación, eliminando los fragmentos de Okazaki y corrigiéndo los errores producidos por la polimerasa de tipo 3. Para realizar ésta actividad, una ADN polimerasa de tipo I posee dos tipos de actividades exonucleasas. Una actividad exonucleasa 5' ---> 3' que elimina todos los nucleótidos (ribonucleótido o desoxiribonucleótido) situados al final del cebador. Esta actividad es muy útil para la reacción en cadena en tiempo real y en la técnica del marcado de sondas denominada translación nick (nick translation). La otra actividad (3' ---> 5') es la actividad "proofreading", osea la correción de errores. Esta actividad no existe en los procariotas (bacterias), solamente en los eucariotas y archaea. Las polimerasas que poseen ésta actividad exonucleasas producen menos faltas pero son sustancialmente más lentas.

Por ejemplo la Taq polimerasa de Thermus aquaticus ajusta ó añade 500-1000 nt por minuto a 72°.

Las ADN polimerasas termoresistentes fueron aisladas de organismos resistentes a temperaturas elevadas, bacteria s ó archeae. Ellas permiten trabajar a temperaturas que permiten el aparamiento perfecto del cebador al molde. Estas polimerasas pueden resistir temperaturas de ± 70 donde pueden solamente perder hasta el 40% de ésta actividad por hora.

Polimerasa: enzima exonuclesa

TECNICAS DE DNA RECOMBINANTE

ADN recombinante es una molécula que proviene de la unión artificial de dos fragmentos de ADN. Por lo tanto, la tecnología de ADN recombinante es el conjunto de técnicas que permiten aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulación e inserción en otro diferente. De esta manera podemos hacer que un organismo (animal, vegetal, bacteria, hongo) o un virus produzca una proteína que le sea totalmente extraña. 

Procesamiento del RNAm

Un poco después de que se inicia la transcripción, se realiza una

modificación del transcrito primario consistente en la adición de una caperuza (Cap) sobre el extremo 5’. Esta caperuza, formada por la adición de un residuo de 7’-metil guanosina enlazado a traves de un enlace trifosfato, proteje al RNAm de la actividad de exonucleasas y aparentemente promueve su traducción en la maquinaria ribosoma.

Corte y empalme de intrones

El proceso más dramático y complejo que debe sufrir el RNAhn, antes de ser RNAm, es la supresión de los intrones. Durante este proceso, que se ha llamado ayuste o corte y empalme (splicing), cada intron es eliminado en una configuración desusada llamada “lariat” o lazo.