Antibiograma

Elaboración de un Antibiograma

OBJETIVOS

·         Determinar la sensibilidad a diversos antibióticos de un determinado microorganismo

·         Comprender el concepto de antibiótico y su especificidad  de acción sobre determinadas bacterias.

·         Conocer el concepto de cepa sensible y  resistente.

·         Entender el concepto de halo de inhibición.

·         Ser consciente de la importancia de la higiene y el cuidado en la manipulación de materiales biológicos.

·         Comprender la importancia de la eliminación de los  residuos orgánicos

·         Conocer el instrumental de laboratorio necesario en microbiología y los procedimientos para su utilización

MATERIALES

·         Jeringa con suero fisiológico estéril (solución de Nacl  al 0,9%)

·         Placa “problema” (cultivada en agar-sangre)

·         Discos de diferentes tipos de antibióticos (4-6 tipos distintos)

·         Tubos de ensayo

·         Placa agar-sangre

·         Regla milimetrada

·         Rotulador de vidrio

·         Cinta adhesiva

·         Pinzas finas

·         Contenedor con lejía

·         Torunda estéril

·         Tablas para determinación de resistencias

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA 
 

·         No se puede tocar nada que vaya a tomar contacto con la muestra biológica con las manos (depresor, asa de siembre, torunda,...) para evitar contaminaciones.

·         Una vez utilizado este material ha de ser eliminado en un  contenedor especial. Estos contenedores serán llevados posteriormente a una planta de tratamiento de residuos biológicos, donde serán incinerados.

·         Todos los materiales o muestras tomadas deben estar perfectamente identificados: nombre, grupo, fecha e indicativo del tipo de muestra.

·         Las placas sembradas deben sellarse con cinta adhesiva al finalizar para evitar su contaminación o la nuestra.

·         Al acabar la práctica, se deben lavar bien las manos.

Siembra en césped del microorganismo problema

·         Tomamos con una jeringa una pequeña cantidad de suero fisiológico estéril (2-5 ml) y lo vertemos en un tubo de ensayo.

·         A  partir de la placa problema, que contiene colonias del  microorganismo cuya  sensibilidad a los antibióticos queremos determinar, tomamos  una muestra  SUPERFICIAL de  UNA SOLA COLONIA con  un asa de  siembra.

·         Introducimos  el asa de siembra con la muestra en el tubo  y agitamos el asa  para realizar  una suspensión de las bacterias en el suero  fisiológico. Al acabar echamos al  contenedor de residuos el asa de  siembra.

·         Introducimos un  hisopo estéril en el tubo,  mojar el  hisopo estéril en la  suspensión. Escurrir el exceso de líquido contra las  paredes del tubo de  ensayo. Tapar el tubo e inocular la placa pasando muy  suavemente por la  superficie de la placa agar-sangre nueva. En esta ocasión  realizaremos una  siembra en césped, es decir, por toda la  superficie de la placa,  para conseguir que crezca bacterias de modo masivo (no  interesa aislar  bacterias como en la práctica del frotis faríngeo). Es  importante que la  siembra sea SUPERFICIAL, sin profundizar en el medio de  cultivo.  (se puede Inocular dos veces más en ángulos de 60°)

·         Se tapa la placa  y se rotula indicando en el nombre, grupo y fecha y marcando con  una A la tapa (Antibiograma) 

Colocación de los discos de antibiótico

Tomando ahora con las pinzas - NUNCA CON LAS MANOS- un disco de cada uno de los antibióticos que se facilitan (cada disco es un papel de filtro que contiene una suspensión de uno varios antibióticos a la  concentración terapéutica). 
 
Se deposita el disco suavemente sobre la placa, sin tocar  la superficie con las pinzas. es muy importante que el disco contacte con el  medio de cultivo en un unico sitio. Realizamos la misma operación con los otros  cinco antibióticos, colocando los nuevos discos separados de los anteriores,  formando un hexágono.

 Incubación y observación. Se llevan las placas a  incubar a 37°C (temperatura corporal) durante 24 horas. tras este periodo se  recogen las placas y SIN ABRIR se observa el crecimiento  bacteriano. 

 Medición del halo de inhibición. Porla parte trasera de la placa incubada mediremos el  diámetro de los halos de 
inhibición que se han formado alrededor de los discos  de antibiótico a los que la bacteria “problema” es sensible. 
Anota  los datos en la representación de la figura 2,  indicando con un número del 1 al 6, el antibiótico colocado en el disco y  dibujando la presencia o ausencia de halos y su tamaño en mm.

Con ayuda de las tablas que se te proporcionan determina  si la bacteria es sensible (S) o resistente (R) a cada antibiótico y anótalo en la tabla, en las columnas correspondientes.

Conceptos Básicos

·         Desinfección: este proceso reduce en 3 a 5 log, la contaminación microbiana inicial. Produce la destrucción de agentes infecciosos o contaminantes presentes en objetos y ambientes.

·         Esterilización: proceso validado usado para obtener un producto libre de todo microorganismo en estado latente o activo, causante de enfermedades infecciosas.

·         Antisepsia: se define como el empleo de medicamentos para eliminar bacterias y microorganismos infecciosos. Son sustancias capaces de destruir y eliminar microorganismos causantes de una infección producida por bacterias (Faringitis, Bronquitis, Otitis, Neumonía.).

Condiciones de Asepsia

1.      Lavado de manos.

2.      Lavado y desinfección de mesa.

3.      Forrar la mesa con papel estraza.

4.      Crear un campo estéril en área de trabajo con un mechero (Fisher).

5.      Flamear asa de platino (Posición perpendicular), procurar hacerlo en la parte alta del mechero.

6.      Antes de retirar el asa, flamear la punta metálica, esperar a que se enfrié.

7.      Flamear la boca de los tubos, matraces o frascos (lo que se esté utilizando).

8.      Después de quitar el algodón de la boca del tubo, nunca dejar sobre la mesa, se toma con el dedo meñique de la mano, siempre trabajando en la proximidad del mechero.

9.      Uso de guantes de latex y cubrebocas (De preferencia el analista con más razón)

Manipulación de la caja

1.      Siempre estarán en posición invertida antes de tomar el inoculo o sembrar.

2.      Se toma la base de la placa con la mano contraria a la que sostiene el asa, dejando la tapa al lado del mechero, todo esto se hace dentro de la zona estéril del mechero, (El área estéril que provoca el mechero tiene un radio de 10 cm).