Estafilococo Medio 110.
Es un medio selectivo para
el aislamiento y diferenciación presuntiva de estafilococos, en base a la
producción
de pigmentos, la fermentación de manitol y la hidrólisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras.
FUNDAMENTO
Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicación alimentaria, y para su aislamiento, pueden usarse distintos medios sólidos selectivos: Baird Parker Medio (B02-141-05/06), Manitol Salado Agar (B02-118-05/06), o Estafilococo Medio 110 (B02-105-05/06). En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la tripteína aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables. El cloruro de sodio, se encuentra en alta concentración, para inhibir el desarrollo de la flora acompañante excepto Staphylococcus spp., lográndose así un medio selectivo para el desarrollo de estos microorganismos. Las ventajas de este medio por sobre los otros mencionados anteriormente, es que permite, en la misma placa, obtener pruebas de identificación presuntiva de especie como ser: desarrollo de pigmentos, fermentación de manitol e hidrólisis de la gelatina.
de pigmentos, la fermentación de manitol y la hidrólisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras.
FUNDAMENTO
Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicación alimentaria, y para su aislamiento, pueden usarse distintos medios sólidos selectivos: Baird Parker Medio (B02-141-05/06), Manitol Salado Agar (B02-118-05/06), o Estafilococo Medio 110 (B02-105-05/06). En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la tripteína aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables. El cloruro de sodio, se encuentra en alta concentración, para inhibir el desarrollo de la flora acompañante excepto Staphylococcus spp., lográndose así un medio selectivo para el desarrollo de estos microorganismos. Las ventajas de este medio por sobre los otros mencionados anteriormente, es que permite, en la misma placa, obtener pruebas de identificación presuntiva de especie como ser: desarrollo de pigmentos, fermentación de manitol e hidrólisis de la gelatina.
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Fórmula
(en gramos por litro)
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Instrucciones
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Extracto
de levadura
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2.5
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Suspender
149 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar
calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos. Esterilizar en autoclave
durante 15 minutos a 121°C. Verter en placas y mezclar para dispersar el
precipitado.
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Tripteína
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10.0
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Gelatina
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30.0
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Lactosa
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2.0
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D-Manitol
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10.0
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Cloruro
de sodio
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75.0
|
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Fosfato
dipotásico
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5.0
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Agar
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15.0
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pH
final: 7.0 ± 0.2
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Siembra
Directa, en superficie, por estriado o por extensión.
Incubación
Durante 48 horas, a 35-37 °C, en aerobiosis.
Resultados
Observar las características de las colonias y realizar las pruebas de identificación de microorganismos.
1-Fermentación de manitol: agregar unas gotas de púrpura de bromocresol a las zonas donde se encuentran las colonias sospechosas y en una zona de la placa donde no hay desarrollo bacteriano. Comparar el color desarrollado entre estas dos zonas.
Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento bacteriano. El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio.
Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento bacteriano y la zona sin inocular.
2-Hidrólisis de la gelatina: cubrir la placa 5 ml de una solución saturada de sulfato de amonio y colocar en estufa, a 35-37 ºC, en aerobiosis durante 10 minutos.
Positiva: halo transparente alrededor de las colonias.
Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las colonias.
Directa, en superficie, por estriado o por extensión.
Incubación
Durante 48 horas, a 35-37 °C, en aerobiosis.
Resultados
Observar las características de las colonias y realizar las pruebas de identificación de microorganismos.
1-Fermentación de manitol: agregar unas gotas de púrpura de bromocresol a las zonas donde se encuentran las colonias sospechosas y en una zona de la placa donde no hay desarrollo bacteriano. Comparar el color desarrollado entre estas dos zonas.
Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento bacteriano. El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio.
Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento bacteriano y la zona sin inocular.
2-Hidrólisis de la gelatina: cubrir la placa 5 ml de una solución saturada de sulfato de amonio y colocar en estufa, a 35-37 ºC, en aerobiosis durante 10 minutos.
Positiva: halo transparente alrededor de las colonias.
Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las colonias.
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Microorganismo
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Pigmento
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Fermentación
de manitol
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Hidrólisis
de la gelatina
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Prueba
de la coagulasa
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S.
aureus ATCC 25923
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+
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+
|
+
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+
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S.
aureus ATCC 6538
|
+
|
+
|
+
|
+
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S.
epidermidis ATCC 14990
|
-
|
-
|
+
|
-
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Notas:
“Realización de la Prueba de la coagulasa”: agregar a 0,5 ml de plasma heparinizado (preferentemente de conejo o humano), igual volumen de un cultivo de 24 horas en Cerebro Corazón Infusión (B02-146-05/06), obtenido a partir de las colonias sospechosas. Incubar a 35-37 °C durante 2 a 3 horas, en aerobiosis. Los estafilococos coagulasa positivos forman un coágulo antes de ese período.
“Realización de la Prueba de la coagulasa”: agregar a 0,5 ml de plasma heparinizado (preferentemente de conejo o humano), igual volumen de un cultivo de 24 horas en Cerebro Corazón Infusión (B02-146-05/06), obtenido a partir de las colonias sospechosas. Incubar a 35-37 °C durante 2 a 3 horas, en aerobiosis. Los estafilococos coagulasa positivos forman un coágulo antes de ese período.
Limitaciones
-Algunas cepas de Enterococcus faecalis, fermentadoras de manitol, pueden desarrollar en este medio.
-Para realizar la prueba de la coagulasa, se aconseja subcultivar las colonias sospechosas en medios sólidos o líquidos no selectivos, por ejemplo: Agar Nutritivo, Infusión Cerebro Corazón, Triptosa Fosfato Caldo, debido a que si se realiza directamente de este medio de cultivo, puede afectarse la detección por el alto contenido de cloruro de sodio.
-Algunas cepas de Enterococcus faecalis, fermentadoras de manitol, pueden desarrollar en este medio.
-Para realizar la prueba de la coagulasa, se aconseja subcultivar las colonias sospechosas en medios sólidos o líquidos no selectivos, por ejemplo: Agar Nutritivo, Infusión Cerebro Corazón, Triptosa Fosfato Caldo, debido a que si se realiza directamente de este medio de cultivo, puede afectarse la detección por el alto contenido de cloruro de sodio.
Características
del medio
Medio preparado: ámbar claro, opalescente con precipitado.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Medio preparado: ámbar claro, opalescente con precipitado.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
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Presentación
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x
100g :Código: B02-105-05
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x
500g :Código: B02-105-06
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AGAR ESTAFILOCOCOS NO. 110
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USO:
El Agar Estafilococos No.
110 es utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos en base
a la fermentación de manitol, la formación de pigmento y la hidrólisis de
gelatina.
FÓRMULA: (aproximada en
g/L)
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Gelatina Bacteriológica
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30.0 g
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Lactosa
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2.0 g
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Extracto de Levadura
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2.5 g
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D- Manitol
|
10.0 g
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Peptona de Caseína
|
10.0 g
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Cloruro de Sodio
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75.0 g
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Fosfato dipotásico
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5.0 g
|
Agar Bacteriológico
|
15.0 g
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pH 7.0 ± 0.2
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PREPARACIÓN:
Método
Suspender 149 g del medio en un litro de agua
purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir
durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121 °C (15 libras de presión)
durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y vaciar en
placas de Petri estériles.
Procedimiento
Sembrar las placas por el método de estría e
incubarlas a 35 ± 2 °C durante 24 a 48 horas. Proceder a la identificación.
PRESENTACIONES:
Medio deshidratado: Frasco 450 g y 500 g,
Caja c/20 sobres p/1 litro, Cubeta 5 kg y 10 kg.
Medio preparado: Paquete con 10 placas.
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