Estafilococo Medio 110.
Es un medio selectivo para
el aislamiento y diferenciación presuntiva de estafilococos, en base a la
producción
de pigmentos, la fermentación de manitol y la hidrólisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras.
FUNDAMENTO
Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicación alimentaria, y para su aislamiento, pueden usarse distintos medios sólidos selectivos: Baird Parker Medio (B02-141-05/06), Manitol Salado Agar (B02-118-05/06), o Estafilococo Medio 110 (B02-105-05/06). En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la tripteína aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables. El cloruro de sodio, se encuentra en alta concentración, para inhibir el desarrollo de la flora acompañante excepto Staphylococcus spp., lográndose así un medio selectivo para el desarrollo de estos microorganismos. Las ventajas de este medio por sobre los otros mencionados anteriormente, es que permite, en la misma placa, obtener pruebas de identificación presuntiva de especie como ser: desarrollo de pigmentos, fermentación de manitol e hidrólisis de la gelatina.
de pigmentos, la fermentación de manitol y la hidrólisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras.
FUNDAMENTO
Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicación alimentaria, y para su aislamiento, pueden usarse distintos medios sólidos selectivos: Baird Parker Medio (B02-141-05/06), Manitol Salado Agar (B02-118-05/06), o Estafilococo Medio 110 (B02-105-05/06). En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la tripteína aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables. El cloruro de sodio, se encuentra en alta concentración, para inhibir el desarrollo de la flora acompañante excepto Staphylococcus spp., lográndose así un medio selectivo para el desarrollo de estos microorganismos. Las ventajas de este medio por sobre los otros mencionados anteriormente, es que permite, en la misma placa, obtener pruebas de identificación presuntiva de especie como ser: desarrollo de pigmentos, fermentación de manitol e hidrólisis de la gelatina.
Fórmula
(en gramos por litro)
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Instrucciones
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Extracto
de levadura
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2.5
|
Suspender
149 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar
calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos. Esterilizar en autoclave
durante 15 minutos a 121°C. Verter en placas y mezclar para dispersar el
precipitado.
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Tripteína
|
10.0
|
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Gelatina
|
30.0
|
|
Lactosa
|
2.0
|
|
D-Manitol
|
10.0
|
|
Cloruro
de sodio
|
75.0
|
|
Fosfato
dipotásico
|
5.0
|
|
Agar
|
15.0
|
|
pH
final: 7.0 ± 0.2
|
||
Siembra
Directa, en superficie, por estriado o por extensión.
Incubación
Durante 48 horas, a 35-37 °C, en aerobiosis.
Resultados
Observar las características de las colonias y realizar las pruebas de identificación de microorganismos.
1-Fermentación de manitol: agregar unas gotas de púrpura de bromocresol a las zonas donde se encuentran las colonias sospechosas y en una zona de la placa donde no hay desarrollo bacteriano. Comparar el color desarrollado entre estas dos zonas.
Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento bacteriano. El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio.
Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento bacteriano y la zona sin inocular.
2-Hidrólisis de la gelatina: cubrir la placa 5 ml de una solución saturada de sulfato de amonio y colocar en estufa, a 35-37 ºC, en aerobiosis durante 10 minutos.
Positiva: halo transparente alrededor de las colonias.
Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las colonias.
Directa, en superficie, por estriado o por extensión.
Incubación
Durante 48 horas, a 35-37 °C, en aerobiosis.
Resultados
Observar las características de las colonias y realizar las pruebas de identificación de microorganismos.
1-Fermentación de manitol: agregar unas gotas de púrpura de bromocresol a las zonas donde se encuentran las colonias sospechosas y en una zona de la placa donde no hay desarrollo bacteriano. Comparar el color desarrollado entre estas dos zonas.
Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento bacteriano. El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio.
Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento bacteriano y la zona sin inocular.
2-Hidrólisis de la gelatina: cubrir la placa 5 ml de una solución saturada de sulfato de amonio y colocar en estufa, a 35-37 ºC, en aerobiosis durante 10 minutos.
Positiva: halo transparente alrededor de las colonias.
Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las colonias.
Microorganismo
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Pigmento
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Fermentación
de manitol
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Hidrólisis
de la gelatina
|
Prueba
de la coagulasa
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S.
aureus ATCC 25923
|
+
|
+
|
+
|
+
|
S.
aureus ATCC 6538
|
+
|
+
|
+
|
+
|
S.
epidermidis ATCC 14990
|
-
|
-
|
+
|
-
|
Notas:
“Realización de la Prueba de la coagulasa”: agregar a 0,5 ml de plasma heparinizado (preferentemente de conejo o humano), igual volumen de un cultivo de 24 horas en Cerebro Corazón Infusión (B02-146-05/06), obtenido a partir de las colonias sospechosas. Incubar a 35-37 °C durante 2 a 3 horas, en aerobiosis. Los estafilococos coagulasa positivos forman un coágulo antes de ese período.
“Realización de la Prueba de la coagulasa”: agregar a 0,5 ml de plasma heparinizado (preferentemente de conejo o humano), igual volumen de un cultivo de 24 horas en Cerebro Corazón Infusión (B02-146-05/06), obtenido a partir de las colonias sospechosas. Incubar a 35-37 °C durante 2 a 3 horas, en aerobiosis. Los estafilococos coagulasa positivos forman un coágulo antes de ese período.
Limitaciones
-Algunas cepas de Enterococcus faecalis, fermentadoras de manitol, pueden desarrollar en este medio.
-Para realizar la prueba de la coagulasa, se aconseja subcultivar las colonias sospechosas en medios sólidos o líquidos no selectivos, por ejemplo: Agar Nutritivo, Infusión Cerebro Corazón, Triptosa Fosfato Caldo, debido a que si se realiza directamente de este medio de cultivo, puede afectarse la detección por el alto contenido de cloruro de sodio.
-Algunas cepas de Enterococcus faecalis, fermentadoras de manitol, pueden desarrollar en este medio.
-Para realizar la prueba de la coagulasa, se aconseja subcultivar las colonias sospechosas en medios sólidos o líquidos no selectivos, por ejemplo: Agar Nutritivo, Infusión Cerebro Corazón, Triptosa Fosfato Caldo, debido a que si se realiza directamente de este medio de cultivo, puede afectarse la detección por el alto contenido de cloruro de sodio.
Características
del medio
Medio preparado: ámbar claro, opalescente con precipitado.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Medio preparado: ámbar claro, opalescente con precipitado.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación
|
|
x
100g :Código: B02-105-05
|
x
500g :Código: B02-105-06
|
AGAR ESTAFILOCOCOS NO. 110
|
USO:
El Agar Estafilococos No.
110 es utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos en base
a la fermentación de manitol, la formación de pigmento y la hidrólisis de
gelatina.
FÓRMULA: (aproximada en
g/L)
Gelatina Bacteriológica
|
30.0 g
|
Lactosa
|
2.0 g
|
Extracto de Levadura
|
2.5 g
|
D- Manitol
|
10.0 g
|
Peptona de Caseína
|
10.0 g
|
Cloruro de Sodio
|
75.0 g
|
Fosfato dipotásico
|
5.0 g
|
Agar Bacteriológico
|
15.0 g
|
pH 7.0 ± 0.2
|
PREPARACIÓN:
Método
Suspender 149 g del medio en un litro de agua
purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir
durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121 °C (15 libras de presión)
durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y vaciar en
placas de Petri estériles.
Procedimiento
Sembrar las placas por el método de estría e
incubarlas a 35 ± 2 °C durante 24 a 48 horas. Proceder a la identificación.
PRESENTACIONES:
Medio deshidratado: Frasco 450 g y 500 g,
Caja c/20 sobres p/1 litro, Cubeta 5 kg y 10 kg.
Medio preparado: Paquete con 10 placas.
ALGO MAS SOBRE EL ESTAFILOCOCO
Estafilococo , del griego Staphylé, que significa racimo de uvas, es una variedad bacteriana de la familia de los cocos. Poseen forma esférica y se agrupan formando grandes masas bacterianas en forma de racimo. Son del tipo conocido como gram positivo. Los estafilococos son la variedad más virulenta de la familia de los cocos, y son responsables de un gran espectro de enfermedades, desde infecciones cutáneas hasta neumonía, sepsis, etc.
Estos microorganismos están presentes en la mucosa y en la piel de los humanos y de otros mamíferos y aves. El género comprende en la actualidad a 32 especies y 15 subespecies, muchas de las cuales se encuentran en los humanos. Las especies que se asocian con más frecuencia a las enfermedaes en humanos son Staphylococcus aureus (el miembro más virulento y conocido del género), Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophticus, Staphylococcus capitis y Staphylococcus haemolyticus.
Los estafilococos crecen facilmente sobre casi todos los medios bacteriológicos, en condiciones aeróbicas se da el mejor crecimiento . Su mayor velocidad de crecimiento es a 5-25ºC.pero tambien se puede ver en activa fision binaria entre 30 y 27 ºC
Los Estafilococos producen catalasa, lo que los diferencia de los estreptococos.
Tiene importancia medica mayoritariamente el aureus, y en humanos ademas de este, el saprofiticus y el epidermides
Contiene varias caracteristicas en sus factores de virulencia en su estructura se encuentran los acidos teicoico y lipoteicoico, y los peptido glicanos Los acidos le sirven para adherirse a superficies corporales junto con las especies de estafilococo que tienen capsula, y en conjunto los acidos teicoicos y el peptido glicano tienen la caracteristica que activan el sistema inmune del complemento y sirven ademas de evasores de la fagocitosis
Entre sus factores de virulencia que le sirven para la invasiòn y le sirven al laboratorista para su identificaciòn estan: La presencia de catalasa La presencia de Coagulasa en el caso del estafilococo aureus (patogneumonico) La Fermentaciòn de el azucar Manitol especifico como la cuagulasa del estafilococo aureus (el mas importante) Presencia de B galactamasa, que rompe el anillo b galactamico de los antibioticos con esta estructura
Las enfermedades que puede desarrollar el genero estafilococo estan mediadadas por la produccion de toxinas, entre las cuales estan
Enterotoxinas - Diarreas, vomito, nauseas
Daño en la piel, separando el estrato granuloso del corneo dando el signo de piel escaldada
Enfermedades comunes- Forunculos , Impetigo Ampolloso
y la mas grave para el humano, el estafilococo aureus puede matar por insuficiencia cardiaca debido a una Endocarditis bacteriana, siendo la endocarditis en humanos la mas frecuente subsecuente a la infeccion por estafilococo aureus
Resumiendo El estafilococo aureus es una infeccion comun y de larga historia pues es resistente a la penicilina, y con esto se ha vuelto un importante reto para la comunidad medica, aparte de dar las enfermedades de dificil manejo anteriormente descritas, se le ha encontrado tropismo por el polivinilo material usado en los cateteres y con el cual se aumenta el riesgo a la infecciòn nosocomial..
Estos microorganismos están presentes en la mucosa y en la piel de los humanos y de otros mamíferos y aves. El género comprende en la actualidad a 32 especies y 15 subespecies, muchas de las cuales se encuentran en los humanos. Las especies que se asocian con más frecuencia a las enfermedaes en humanos son Staphylococcus aureus (el miembro más virulento y conocido del género), Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophticus, Staphylococcus capitis y Staphylococcus haemolyticus.
Los estafilococos crecen facilmente sobre casi todos los medios bacteriológicos, en condiciones aeróbicas se da el mejor crecimiento . Su mayor velocidad de crecimiento es a 5-25ºC.pero tambien se puede ver en activa fision binaria entre 30 y 27 ºC
Los Estafilococos producen catalasa, lo que los diferencia de los estreptococos.
Tiene importancia medica mayoritariamente el aureus, y en humanos ademas de este, el saprofiticus y el epidermides
Contiene varias caracteristicas en sus factores de virulencia en su estructura se encuentran los acidos teicoico y lipoteicoico, y los peptido glicanos Los acidos le sirven para adherirse a superficies corporales junto con las especies de estafilococo que tienen capsula, y en conjunto los acidos teicoicos y el peptido glicano tienen la caracteristica que activan el sistema inmune del complemento y sirven ademas de evasores de la fagocitosis
Entre sus factores de virulencia que le sirven para la invasiòn y le sirven al laboratorista para su identificaciòn estan: La presencia de catalasa La presencia de Coagulasa en el caso del estafilococo aureus (patogneumonico) La Fermentaciòn de el azucar Manitol especifico como la cuagulasa del estafilococo aureus (el mas importante) Presencia de B galactamasa, que rompe el anillo b galactamico de los antibioticos con esta estructura
Las enfermedades que puede desarrollar el genero estafilococo estan mediadadas por la produccion de toxinas, entre las cuales estan
Enterotoxinas - Diarreas, vomito, nauseas
Daño en la piel, separando el estrato granuloso del corneo dando el signo de piel escaldada
Enfermedades comunes- Forunculos , Impetigo Ampolloso
y la mas grave para el humano, el estafilococo aureus puede matar por insuficiencia cardiaca debido a una Endocarditis bacteriana, siendo la endocarditis en humanos la mas frecuente subsecuente a la infeccion por estafilococo aureus
Resumiendo El estafilococo aureus es una infeccion comun y de larga historia pues es resistente a la penicilina, y con esto se ha vuelto un importante reto para la comunidad medica, aparte de dar las enfermedades de dificil manejo anteriormente descritas, se le ha encontrado tropismo por el polivinilo material usado en los cateteres y con el cual se aumenta el riesgo a la infecciòn nosocomial..
¿Que forma tienen los estafilococcos y como se clasifican?
ResponderBorrargracias por la informacion
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