“TÉCNICAS DE DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES Y MEDIOS DE CULTIVO”.

La evaluación de la calidad microbiológica del ambiente nos indica la cantidad de microorganismos que están presentes en un área determinada. Los microorganismos generalmente no están flotando en el aire sino que se encuentran sobre partículas inertes, por ejemplo polvo, gotas de agua, etc. que le sirven como medio de transporte, las cuales pueden depositarse sobre las superficies; es por ello que mientras más limpia es un área, menor será el número de microorganismos presentes en el aire de la misma. Las personas también son una fuente de contaminación, ya que liberan gran cantidad de partículas al moverse, toser, estornudar, por exfoliación de la piel, etc. Algunas de estas partículas llevan microorganismos que podrían contaminar el material con el que estamos trabajando; en este sentido los antisépticos, deben ser usados por el personal para descontaminar la piel y los tejidos expuestos antes de entrar a las áreas de manufactura. Por todo lo expuesto anteriormente, es necesario determinar la calidad microbiológica del aire, las superficies y el personal.

Los principales objetivos del lavado que se considera la primera etapa del proceso de esterilización son:

I.            Eliminar  la materia orgánica

II.            Disminuir la carga microbiana

III.            Evitar la incrustación en el material de elementos no deseados

IV.            Asegurar las condiciones de limpieza

NORMAS BÁSICAS DE ESTERILIZACIÓN

1.       Limpieza

2.       Desinfección

3.       Preparación y empaque de materiales

4.       Esterilización. 

1.        La limpieza consiste en la remoción de la suciedad mediante la aplicación de la energía química, mecánica o térmica en periodo de determinado tiempo y puede ser:

A)       Química  acción de productos de limpieza  tiene  la finalidad de limpiar por medio de las propiedades de la disolución, dispersión y suspensión de la suciedad. 

B)      Mecánica acción física aplicada sobre una superficie para remover la suciedad resistente a la acción de los productos químicos resistente a la acción del producto químico (fregar, cepillar). 

C)      Térmica acción del calor que reduce la viscosidad de la grasa, facilitando la remoción por la acción química.

Etapas de limpieza. 

 1-Prelavado Lavado (manual o mecánico) 

 2- Enjuague y secado.

ANTISEPTICOS Y DESINFECTANTES

Los antisépticos se usan para las personas. (Clorhexidina, yodóforos)

Los desinfectantes se usan para los objetos y superficies inanimadas. (Alcoholes, cloro y sus derivados, amonios cuaternarios, fenoles, formaldehido, glutaraldehido, peróxido de hidrógeno estabilizado, ácido peracético etc.

Preparación y empaque del material.

Características:  

1.    Resistente.

    Limpio 
        Permeable 

Existen métodos de esterilización muy comunes que se describen en la siguiente tabla:

Clasificación de métodos de esterilización.

MÉTODOS  FISICOS	MÉTODOS QUÍMICOS
Altas temperaturas	Bajas temperaturas
Calor húmedo (autoclave )	121°C-134°C Óxido de etileno 55°C Vapor de formaldehido 60°C
Calor seco (estufa)	Plasma de peróxido de hidrógeno180°C

Existen  indicadores que comprueban, que existe un proceso de esterilización completa  además que se consideran muy importantes para verificar el proceso de calidad.

a.        Indicadores físicos que son: el termómetro, manómetro de presión, sensores etc.

b.        Indicadores químicos: éstos monitorean directamente la letalidad en un proceso de esterilización.  (Cinta adhesiva mide la temperatura, vira el color).

c.        Indicadores biológicos: son los más confiables ya que se utilizan cepas vivas incubadas a 56°C; consiste en seleccionar un organismo de prueba que posee una resistencia mayor a la esterilización.

*Se emplean esporas de Bacillus Stereothermophillus como indicador de la esterilización por vapor saturado a presión.

*Y también se utilizan como indicador las esporas de Bacillus Subtilis, variedad niger para la esterilización a calor seco.

    

Escribir éste cuestionario y resolverlo, en su bitácora relacionado con el tema “Técnicas de desinfección y esterilización de materiales”  y  agregar a éste diez preguntas con sus respuestas después de haber leído y estudiado el tema desarrollado.

  

CUESTIONARIO

1.       ¿Cuál es la acción destructiva  del calor seco?

El calor seco produce desecación de la célula, es esto tóxico por niveles elevados de electrolitos, fusión de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que están en contacto con éstos.

2.       ¿Cuáles son las ventajas de  la esterilización por vía seca?

v  No es corrosivo para metales e instrumentos.

v  Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no volátiles.

3.       ¿Cuáles son las desventajas de la esterilización por vía seca?

v  Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la baja penetración del calor.                                                                       

4.       ¿De dónde proviene la acción letal de los microorganismos, en la esterilización por vía húmeda?

El efecto que causa este calor es matar al microorganismo por la coagulación de sus proteínas cuando se encuentran en una zona atmósfera húmeda y sometidos a altas temperaturas, además, es mucho más rápido y efectivo en su acción. La acción letal del vapor proviene del calor latente liberado cuando se condensa en una superficie fría aumentando de esta manera la temperatura de la zona enfriada. La destrucción de las esporas bacterianas sigue un comportamiento de forma similar en tanto que el vapor se condensa en la pared de la espora y aumenta su contenido en agua que finalmente hidroliza y degrada el contenido proteico.

5.       ¿Cuál es el efecto del calor húmedo en  los microrganismos?

El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones:

v  El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas son producidas por reacciones que eliminan agua. 

v  El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado que el aire.

Autoclave: Se realiza la esterilización por el vapor de agua a presión. El modelo más usado es el de Chamberland.

6.       ¿En qué consiste la esterilización por Tyndalización?

Es un método de esterilización fraccionada para materiales que se inactivas o estropean a más de 100 ºC. Consiste en someter el material a varios ciclos (3 o 4) de dos fases sucesivas cada uno: 
a) el material se calienta a una temp entre 50 y 100 ºC, durante 1 o 2 hs; 
b) el material se incuba en una estufa, a 30-37ºC durante 24 hs. 

7.       ¿Cuáles son las ventajas de la esterilización por vía húmeda?

Ventajas del calor húmedo:

v  Rápido calentamiento y penetración

v  Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo

v  No deja residuos tóxicos

v  Hay un bajo deterioro del material expuesto

v  Económico

8.       ¿Cuáles son las desventajas de la esterilización por vía húmeda? 

Desventajas:

v  No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua

v  Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos.

9.       Investiga las partes de una olla exprés y su función 

10.    Investiga la función de la autoclave. 

11.    ¿Qué es asepsia? 

Asepsia es un término médico que define al conjunto de métodos aplicados para la conservación de la esterilidad. La presentación y uso correcto de ropa, instrumental, materiales y equipos estériles, sin contaminarlos en todo procedimiento quirúrgico practicado se conoce como asepsia.¹

·         Antisepsia.

·         Asepsia médica.

·         Asepsia quirúrgica.

También se le denomina asepsia a la acción que se realiza en limpiar un área determinada ejemplo al administrar una inyección se debe limpiar adecuadamente con un algodón y alcohol, se le denomina asepsia porque "A" es igual a "Sin" y sepsia es igual a "Microbios o microorganismos"

12.    ¿Qué es antisepsia? 

Antisepsia se define como el empleo de medicamentos o de sustancias químicas (antisépticos) para inhibir el crecimiento, destruir, o disminuir el número de microorganismos de la piel, mucosas y todos los tejidos vivos. Es la ausencia de sepsis (microorganismos capaces de producir putrefacción y/o infección). La finalidad de estos procedimientos es evitar o atenuar el riesgo de infección en toda técnica quirúrgica.

13.    ¿En qué consiste la pasteurización?

La pasteurización consiste, básicamente, en algo tan sencillo como calentar los alimentos con objeto de reducir los agentes patógenos que puedan contener, ya sean bacterias, protozoos, levaduras o mohos. De esta forma se evita que éstos se transfieran al ser humano provocando enfermedades. Además, el proceso de pasteurización permite conservar las propiedades nutritivas de los alimentos y mantener su sabor y aroma. Tras realizarla, los productos se enfrían rápidamente y se sellan de modo hermético. Así su fecha de caducidad se prolonga, con los consiguientes beneficios para transportarlos y almacenarlos.

14.    ¿Qué es un agente químico? 

Sustancias: son los elementos químicos y sus compuestos en estado natural, o los que se obtienen mediante cualquier procedimiento de producción, incluidos los aditivos necesarios para conservar la estabilidad del producto y las impurezas que resulten del procedimiento utilizado; pero excluidos los disolventes que se puedan separar sin afectar a la estabilidad mi modificar su composición. Los agentes químicos peligrosos (sustancias y preparados) son aquellos que por sus características pueden dañar directa o indirectamente a las personas, los bienes y/o al medio ambiente.

15.    ¿Qué es una agente físico? 

Los agentes físicos son medios utilizados en la profesión de la fisioterapia para sus diversas técnicas de tratamiento. Estos, son una forma de tratamiento que ayudaran a mejorar y fortalecer la situación de salud que el paciente presente. Los agentes físicos los encontramos en el medio ambiente y en terapia física aprendemos la ciencia de utilizarlos y sacarles provecho para obtener  en base a sus efectos fisiológicos, beneficios para el organismo humano. Los beneficios de utilizar agentes físicos es que su costo es bajo, sus efectos son excelentes  y rápidos, además de permitir múltiples maneras de aplicación, haciéndolos adaptables a casi cualquier lesión, enfermedad o afección.

16.    ¿Qué es un agente antimicrobiano?

Un agente antimicrobiano se refiere Sustancias químicas sintetizadas parcial o totalmente en laboratorio que son capaces de inhibir el crecimiento y/o destruir microorganismos. 
Estos pueden ser:
Naturales: se obtienen a partir de microorganismos (hongos, Bacterias, etc.). 
Sintéticos: se obtienen totalmente por síntesis química. 
Semisintéticos: se obtienen por modificaciones químicas de antimicrobianos naturales, con el fin de mejorarlos.

17.    ¿Cuáles  son las etapas de limpieza?

La limpieza: Es la acción de eliminar de una superficie las suciedades como los restos de alimentos, grasa, polvo, tierra o residuos de sustancias utilizadas en una actividad determinada. Con su realización se produce una importante eliminación de agentes contaminantes y facilita el efecto de los desinfectantes.
Etapas o procedimientos de limpieza:
" La eliminación de suciedades por raspado, aspiración, cepillado, restregado u otros métodos.
" Aplicación de agua a una temperatura que corresponda con el tipo de suciedad a eliminar.
" Aplicar de una solución con detergentes para desprender la capa de suciedad y mantenerla en solución o suspensión.
" Enjuagar con agua para eliminar la suciedad desprendida y los residuos de detergentes
" En algunos casos se requiere aplicar a la superficie a tratar, agua con distintos tipos de sustancias químicas para facilitar la separación de costras, grasa antes de realizar el procedimiento indicado en el párrafo anterior.
Es posible que sea necesario repetir este proceso hasta que la superficie se encuentre limpia y pueda ser tratada con desinfectantes.

Requisitos a cumplir durante la limpieza:

" Evitar las acciones de barrer en seco que producen la propagación del polvo y pequeñas partículas de suciedades a superficies cercanas.
" Evitar la caída de residuos sólidos en las tuberías que conducen los residuales líquidos para disminuir las posibilidades de obstrucciones en las mismas.
" La limpieza se puede realizar después de separar los equipos en sus diferentes componentes o sin desmontarlos. En el segundo caso es importante que el diseño del equipo permita pasar las soluciones de limpieza a alta velocidad y con un flujo turbulento.

18.    ¿Qué son los antisépticos y a donde se aplican?

Los desinfectantes y antisépticos constituyen una herramienta esencial para controlar la diseminación de agentes infecciosos.

Con su utilización apropiada se pueden obtener máximos beneficios para lo cual se debe tener en cuenta lo siguiente:

·         Ningún desinfectante es universalmente eficaz.

·         Algunos agentes químicos son buenos cono antisépticos, pero no son efectivos como desinfectantes, en tanto otros desinfectantes resultan tóxicos como antisépticos.

·         No todos los elementos que entran en contacto con el paciente deben ser esterilizados ni requieren la misma preparación.

·         Los antisépticos se usan sobre la piel para eliminar o disminuir la flora residente y transitoria de la misma.

·         Los desinfectantes son productos ampliamente utilizados para la destrucción de los microorganismos que habitan sobre una superficie inanimada, con excepción de las esporas bacterianas.

19.    ¿Qué características tiene el empaque y el material?

Empacado del material.

Ø  Lava el material de laboratorio, principalmente la cristalería con detergente (Fácilmente se contamina con esporas difíciles de eliminar) enjuaga con abundante agua de la llave y en seguida con agua destilada.

Ø  Secar  el material utilizando papel absorbente para acelerar el secado

Ø  Empaca el material  correctamente.

a)      CAJAS DE PETRI: Corta el papel estraza, en forma de rectángulos adecuados para la cantidad de 2 a 3 cajas. Colócalas en la parte central y  Envuélvelas según te indique tu profesor. Se toman los extremos  de  Papel y se unen. Se hace un nuevo doblez recargando  ligeramente en la caja para marcarlo, Los extremos se doblan   en forma triangular. Ya en forma triangular se doblan  hacia atrás quedando listas para esterilizar.

b)      PIPETAS: Introduce una pequeña porción de algodón en el cuello de la pipeta, procurando que quede lo suficientemente apretada. Con tiras de papel de 3 cm de ancho envuélvelas, comenzando por la punta y en forma de espiral gira hacia arriba  hasta el final de la pipeta.

c)      TUBOS DE ENSAYE: Se toma el tubo con la mano izquierda y con la derecha el tapón de algodón. Coloca algodón en la boca del tubo a 1/5 parte de la longitud del mismo procurando que quede bien apretado, deposítalos en recipientes adecuados, tápalos  con papel estraza y sellar con la cinta testigo.

d)     MATRACES: Tapa el cuello del matraz con algodón, lo suficientemente apretado para evitar que se destape (se tapa en la misma forma que el tubo). Como protección coloca un gorrito de papel estraza y sellar con cinta testigo.

e)      MATERIAL METÁLICO: El asa de platino, tijeras, bisturí, material quirúrgico no es necesario empacarlo para su esterilización.

20.    ¿Cuáles son los principales objetivos del lavado?

La promoción de adecuada higiene de las manos reduce el riesgo de contraer infecciones asociadas a la atención sanitaria. Esta acción sigue siendo la medida primordial para reducir la incidencia y la propagación de los microorganismos resistentes a los antimicrobianos. Al brindar cuidados con manos seguras, se ofrece un servicio de calidad que preserva la seguridad del paciente en todos los ámbitos, lo que contribuye a disminuir la morbilidad y mortalidad, mitigando el sufrimiento de pacientes y familiares, además disminuye el costo que se genera en las instituciones.

21.    ¿En qué consiste la limpieza?

Limpieza es la acción y efecto de limpiar (quitar la suciedad, las imperfecciones o los defectos de algo; sacar las hojas secas o vainas de las hortalizas y legumbres; hacer que un lugar quede sin aquello que le es perjudicial).

22.    ¿Cuál es la finalidad de hacer una limpieza química?

Para desarrollar correctamente cualquier trabajo en el laboratorio es necesario mantener siempre limpio el material y la mesa de trabajo. El material debe estar limpio y seco antes de empezar el experimento. La limpieza del material se debe realizar inmediatamente después de cada operación ya que es mucho más fácil y además se conoce la naturaleza de los residuos que contiene. Para limpiar un objeto, en primer lugar se quitan los residuos (que se tiran en el recipiente adecuado) con una espátula o varilla y después se limpia con el disolvente apropiado. El agua con jabón es uno de los mejores métodos de limpieza. Ocasionalmente, se utilizan ácidos, bases o disolventes orgánicos para eliminar todos los residuos difíciles. La última operación de lavado consiste en enjuagar todo el material con agua destilada. El material limpio se seca en un soporte adecuado inclinado o vertical, colocando el material boca abajo, o bien se utiliza una estufa de secado. En este último caso el material debe ser introducido en la estufa sin tapones ni llaves.

23.    ¿Qué ventaja tiene la aplicación de la limpieza térmica?

Son de calentamiento rápido, con gran homogeneidad y estabilidad de la temperatura, repetibilidad de los procesos con economía de costos, consumos y mantenimiento. Están previstas para temperaturas de hasta 500 ºC con recirculación exterior de aire, y, en opción, con solera móvil. (Serie SMR). Los hornos de esta serie permiten una gran uniformidad de temperaturas en todo el conjunto del horno pudiendo garantizar la precisión de temperatura que se desee.

24.    ¿Qué son los indicadores físicos?

Son los instrumentos con los que el fabricante diseña el esterilizador, que monitorizan y además deben de registrar el proceso por medio de la impresión de graficas y/o curvas.

Estos instrumentos pueden ser:

·         Termómetros

·         Barómetros de presión

·         Sensores de carga

·         Válvulas y sistemas de registro

·

25.    ¿Qué función tienen los indicadores químicos?

Son dispositivos que contienen sustancias químicas que cambian de color o estado cuando se exponen a una o más variables críticas del proceso de esterilización como temperatura-humedad o temperatura-concentración del agente esterilizante. No garantizan la calidad del proceso debido a:

1. Cambian de color aun cuando no ha terminado el proceso de esterilización

2. Su lectura no es suficientemente clara.

3. Si el indicador no vira se interpreta como falla de proceso y el paquete no debe de ser utilizado.

De acuerdo a la NOM ISO1140 parte 1 se clasifican en seis Clases: Clase 1 o indicadores externos, Clase 2 o indicadores de pruebas específicas, Clase 3 o indicadores uní-parámetro, Clase 4 o indicadores multi-parámetro, Clase 5 o indicador integrador y Clase 6 o indicador emulador.

26.    ¿Qué función tienen los indicadores biológicos?

Los Indicadores biológicos son dispositivos preparados de esporas no patógenas y altamente resistentes (Bacillus stearothermophilus y Bacillus subtilis) a los procesos de esterilización y por lo tanto son útiles y eficaces para establecer la capacidad del ciclo de esterilización para destruir microorganismos específicos, que se sabe que son más resistentes al proceso que se está probando. Las esporas utilizadas provienen de Bacillus subtilis variedad Níger como control biológico de la esterilización por calor seco y óxido de etileno y de Bacillus stearothermophilus para la esterilización por vapor a presión, plasma de peróxido de hidrogeno y formaldehído.

Fuente de obtención de los colorantes.

Atendiendo a la fuente de obtención, los colorantes se clasifican en naturales y sintéticos.

Colorantes naturales. Los colorantes naturales son básicamente histológicos, encontrándose entre los empleados con mayor frecuencia, los siguientes:

v Índigo: Se obtiene de diversas especie de plantas del genero indigófera que contiene indican, el cual se fermenta para producir el colorante.

v Carmín: Se produce, mediante el tratamiento con alumbre y otras sales metálicas a hembras del insecto cochinilla "Coccus castis".

v Orceína y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de líquenes de los géneros: Le canora tinctoria y Rosella tinctoria.

v Hematoxilina: Este colorante se extrae con éter de la madera de un árbol oriundo de México y de algunos países suramericanos denominados Hematoxilium campechianum.

Colorantes sintéticos. Se obtiene de la anilina, o es más exactamente del alquitrán de hulla siendo todos derivados del benceno.

Clasificación

Los colorantes se clasifican, teniendo en cuenta si la propiedad tintorial se encuentra en el anión o el catión de su estructura química. Sobre esta base se pueden dividir en tres grupos: básicos, ácidos y neutros.

v  Colorantes básicos: La acción colorante está a cargo del catión, mientras que el anión no tiene esa propiedad, por ejemplo: - cloruro de azul de metileno+.

v  Colorante ácido: Sucede todo lo contrario, la sustancia colorante está a cargo del anión, mientras que el catión no tiene propiedad, por ejemplo: eosinato- de sodio+

v  Colorantes neutros: Están formados simultáneamente por soluciones acuosas de colorantes ácido y básicos, donde el precipitado resultante, soluble exclusivamente en alcohol, constituye el colorante neutro, que tiene la propiedad tintorial de sus componentes ácidos y básicos, por ejemplo: la giemsa.

Afinidades tintoriales.

En el proceso de la coloración, ocurre una combinación de reacciones físicas y químicas.

v  Reacción física.

Ocurre un fenómeno de absorción similar al que tiene lugar en las materias porosas, considerando que el colorante penetra en los intersticios del cuerpo coloreable y se mantiene allí por la cohesión molecular. 

v Reacción química

Las células microbianas son ricas en ácidos nucleicos que portan cargas negativas en formas de grupos fosfato combinándose como colorante básicos cargados positivamente. Los colorantes ácidos que tienen la acción colorante en el anión no tiñen la célula, se emplean como colorante de contraste para colorear su entorno, como por ejemplo: la tinta china o la eosina que no colorea al microorganismo, pero si el fondo del campo microscópico.

Toxicidad de los colorantes. Ventajas y Desventajas.

Los colorantes son sustancias tóxicas, por lo tanto el proceso de la tinción generalmente resulta letal para los microorganismos, provocando su inmovilización, lo cual puede significar una ventaja o desventaja para el investigador según sean los objetivos con la sustancia colorante. Veamos algunos Ejemplos:

1.        Al ocasionar la muerte de los microorganismos sometidos al proceso de tinción se reducen las posibilidades de contaminación para el manipulador.

2.        Los colorantes pueden ser tóxicos para el manipulador, algunos incluso han resultado cancerígenos por lo que ha habido la necesidad de retirarlos del mercado.

3.        Algunos colorantes solo tienen afecto letal para determinadas especies o géneros bacterianos, siendo utilizados como constituyentes de medios de cultivo selectivo para impedir el desarrollo de microorganismos indeseables y favorecer el desarrollo de las especies que nos interesa estudiar. Por ejemplo: el verde de malaquita.

4.        Otros se emplean como desinfectantes microbianos, más que para teñir, con fines de microscopia, por sus propiedades bacterianas o bacteriostáticas.

5.        Algunos tipos de colorantes son empleados no para teñir, sino como indicadores de pH, formando parte de la composición de los medios de cultivo para indicar los cambios de basicidad o acidez que se vayan produciendo en el medio como consecuencia de su actividad metabólica. Ejemplo: rojo fenol, azul de bromo timol entre otros.

A partir de la tinción de Gram pueden distinguirse varias formas distintas:

- Los cocos de forma esférica. Pueden presentarse aislados después de la división celular (Micrococos), por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o agruparse de manera irregular (Estafilococos).

- Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena (Estreptobacilos) o en empalizada.

- También pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos si son de forma rígida o espiroquetas si son blandas y onduladas, si poseen forma de “coma”, - curvados, entonces se les llama vibriones.

TECNICA DE LA COLORACION GRAM

1) El primer paso es preparar y fijar un frotis de la siguiente manera:

• Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco. - Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta coger un poco de muestra. - Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos, la cual servirá para depositar la muestra contenida en el asa.

• Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos, proceder a realizar la extensión de la muestra en el portaobjetos mediante movimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina, de tal forma que al terminar la extensión, tengamos como producto un espiral en la parte media la lámina.

• Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar. El calor deseable es aquel en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.

2) Una vez obtenido el frotis con la muestra, se procede a teñir la misma con violeta cristal o violeta de genciana, utilizando una cantidad suficiente de dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 grados.

3) Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lámina conteniendo la muestra con agua corriente. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de agua NO debe caer directamente sobre la muestra, ésta debe caer sobre la parte superior de la lámina que no contiene muestra. El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de medio a un centímetro de espesor. También el enjuague se debe realizar poniendo la lámina en posición inclinada hacia abajo.

4) Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol durante 1 minuto más.

• El mordiente es cualquier sustancia que forme compuestos insolubles con colorantes y determine su fijación a las bacterias.

5) Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con etanol al 75 %, etanol al 95 %, acetona o alcohol-acetona, hasta que ya no escurra más líquido azul. Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante. Se van añadiendo cantidades suficientes del decolorante, hasta lograr que éste salga totalmente transparente, es decir, hasta que ya no escurra más líquido azul.

6) Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque la lámina al aire libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma anteriormente descrita.

7) Una vez que la lámina ya secó, procedemos a teñir nuevamente, pero esta vez se va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina, dejar actuar durante 1 minuto.

8) Pasado el minuto correspondiente, se procede a enjuagar la lámina con agua, se escurre el agua sobrante y se seca en la forma anteriormente descrita.

De esta manera, ya tendremos listo el frotis para su respectiva observación microscópica.

Gram(+),                                                            Gram(-)

 

CÉLULAS BACTERIANAS

Entre las principales características de las células bacterianas, cuentan el tamaño, la forma, la estructura y el modo en que se agrupan. Estos caracteres constituyen la morfología de la célula. El tamaño de las bacterias a pesar  de sus dimensiones, microscópicas pueden medirse con exactitud.

Por lo general las células individuales tienen forma esférica, cilíndrica o helicoidal  según su especie. Las células bacterianas esféricas o elipsoidales, se denominan cocos  y algunos de ellos pueden ser:

Diplococos= parejas de células

Estreptococos= hileras de células
Tétradas = cuatro células dispuestas en cuadro
Estafilococo= grupos irregulares, semejantes a racimos de uvas
Sarcinas= agrupamiento en cubo con ocho o más  células

Características de los cultivos (crecimiento)

Características tan importantes como el color (cromogénesis), la abundancia del crecimiento y aún el olor de medio de cultivo, nos brindan datos tan importantes para la identificación de un microorganismo desconocido.

Para determinar las características de crecimiento en un cultivo puro es necesario observar los siguientes tipos de cultivos.

1.    Colonias en agar nutritivos(cultivo en placas)

2.    Crecimiento en agar inclinado

3.    Crecimiento en caldo

4.    Crecimiento en picado de gelatina.

 Aspectos a considerar en el crecimiento de cada uno de los medios es muy importante.

1.    Colonias en placa de agar.

·         Tamaño 

·         Margen o borde

·         Elevación 

·         Cromogénesis o pigmentación

·         Caracteres ópticos

      2. Crecimiento en estrías sobre agar

·         Cantidad

·         Margen o borde de crecimiento

·         Consistencia 

·         Cromogénesis o pigmentación

       3. Crecimiento en caldo nutritivo

·       Valor de crecimiento: escaso, moderado, abundante.

·       Distribución del crecimiento en el caldo

·       Olor: pútrido, de frutas, aromático, imperceptible, tortilla.

      4. Crecimiento en gelatina

v  Crecimiento a lo largo de la línea de siembra

v  Licuación de la gelatina

Morfología de las colonias bacterianas

1.    Descarga este video y observa detenidamente

https://www.dropbox.com/s/z2p9j3u3ob7h7o0/MORFOLOG%C3%8DA%20DE%20COLONIAS%20BACTERIANAS.wmv?dl=0

2. Interpretar la morfología individual de cada característica presentada.

Formas:

·         Circular: Forma de un circulo.

·         Irregular: No tienen forma definida.

·         Rizoide: Pequeños rizos.

·         Filamentosa: En su morfología tiene como orillas punteadas

·         Roseta: Tiene forma parecida a un hongo.

Bordes:

·       Entero: Grueso.

·       Dentado: Brilloso, grueso.

·       Filamentoso: Pequeños picos puntiagudos en forma de agujas.

·       Digitalizado: Pequeños formas de luz.

·       Lacerado: Complexión esponjosa.

·       Rizoide: Pequeños filamentos.

Textura:

          Lisa: Que no tiene ninguna deformación

          Escamosa: Como si fuera la piel de un pez.

          Rugosa: Arrugada, como si fuera una verruga.

          Plegada: Como si fueran los tentáculos de un pulpo.

          Granular: Como si estuviera conformada de granitos diminutos.

Cromogénesis:

v  Amarillo

v  Fucsia

v  Rojo

v  Bruna

v  Blanca

3. Describe a cada colonia:

Ejemplo: Colonia irregular, elevada y convexa, rugosa, amarilla, traslucida.

I.              Colonia Circular, elevación convexa, lisa, traslucida.

II.              Colonia irregular, traslucida, dentado.

III.              Colonia filamentosa, no elevación, escamosa, bruna.

IV.              Colonia en roseta, elevación plana, plegada, blanca, traslucida.

V.              Colonia filamentosa, elevación umbilicada, lisa, blanca.

VI.              Colonia rizoide, elevación plana, ligeramente rugosa, blanca.

VII.              Colonia en roseta, elevación crateriforme, plegada, blanca, opaca.

4. Contesta las siguientes preguntas

a) Busca el significado de cultivo puro y cultivo mixto:

CULTIVO PURO: Los cultivos puros se obtienen habitualmente de cultivos mixtos (que contienen varias especies), por métodos que separan las células de modo que, cuando se multiplican, cada una formará una colonia distinta, que luego puede usarse para establecer nuevos cultivos con la seguridad de que tendrán sólo un tipo de organismo.

CULTIVO MIXTO: El cultivo mixto consiste en plantar distintas variedades en estrecha vecindad, basándose en el antiguo concepto de “plantas compañeras”. El cultivo mixto permite que las cualidades naturales de las diferentes especies se complementen.

b) Investiga cual es el aspecto de un caldo inoculado con:

·         Microorganismos  aerobio estricto: Estos microorganismos crecerán solo si hay presencia de oxigeno (O₂), por eso reciben ese nombre, y también tienen la característica de que crecen en la superficie, es traslucido, tiene un color amarillento bajo, como el de la orina.

·         Microorganismos  anaerobio facultativo: Estos organismos crecen en medios con o sin O₂ y CO₂, al mismo tiempo que crecen en las profundidades del caldo, también presenta un color traslucido.

·         Microorganismos anaerobio estricto: Son aquellas que para crecer en la superficie de un medio de cultivo necesitan una atmósfera sin oxígeno, ya que este elemento es tóxico para ellas. Tienen una apariencia como mucosa, ya que en el medio, son como espesas y se reproducen en la profundidad del medio.

·        5. Caso a resolver.

Supongamos, hemos preparado un cultivo con agar inclinado, en caldo nutritivo y en placa, de un  organismo desconocido que asignaremos como XY.

1.    El crecimiento en caldo forma como un velo espeso, como una película granulosa gruesa, quedando el resto del medio debajo del velo, ligeramente turbio.

2.    Lo referente a las colonias en placa en medio solido se observaron irregulares, levantadas y forma granulosa.

3.    En cuanto al agar inclinado, se intenta retirar algo de cultivo en este agar y se observa un crecimiento extendido, levantado seco, con superficie rugosa y granulada, se observa el medio quebradizo.

4.    Se le hace la prueba ácido resistente y da positiva.

Opciones:

a.       Corynebacterium  diphtheriae

b.      Mycobacterium Tuberculosis

c.       Blastomyces dermatitidis

d.      Criptococcus neoformans

Selecciona ¿Qué tipo de bacteria es y explica en forma breve porque?

La bacteria es Mycobacterium Tuberculosis, ya que es un bacilo que principalmente causa tuberculosis, bacilo acido-resistente.

CARACTERÍSTICAS DE LOS SERES VIVOS

 Complejidad y organización

Un ser vivo consiste en una o más células que trabajan de una forma ordenada. La célula en sí está compuesta por partes individuales que funcionan en coordinación. Varias células se pueden organizar para formar tejidos; un conjunto de tejidos que cumple una función específica es un órgano; los órganos pueden formar sistemas de órganos, etc. Esta estructuración de menos a más complejo se conoce como los niveles jerárquicos de organización. La tendencia a la auto-organización es una característica importante de la vida.

Metabolismo

Los seres vivos necesitan energía para crecer, reproducirse y mantener su complejidad frente a las fuerzas de entropía. Para esto, transforman los materiales químicos y orgánicos por medio de un proceso de síntesis o degradación. Este proceso se conoce como el metabolismo y permite el crecimiento, reparación y conservación del ser vivo. El metabolismo puede ser anabólico o catabólico.

Homeostasis

Los seres vivos necesitan resistir las fuerzas de entropía (la tendencia natural hacia la desorganización). Para mantener la constancia del medio interno de su cuerpo (temperatura corporal, equilibrio de electrolitos, etc.), necesitan gastar energía.

Crecimiento

Todos los seres vivos crecen en algún momento. El crecimiento depende de la habilidad de metabolizar, o cambiar material externo a energía. Los seres vivos crecen de la manera estructurada descrita en el número uno (complejidad y organización).

Reproducción

Todos los seres vivos tienen la habilidad de reproducirse de alguna forma. La reproducción puede ser sexual o asexual. La reproducción asexual normalmente se realiza en organismos más simples y es una extensión del proceso de crecimiento. Por ejemplo, las bacterias crecen hasta cierto punto y luego se dividen, produciendo una copia exacta de la bacteria original. La reproducción sexual generalmente requiere de dos individuos que combinan su material genético para crear un tercer individuo con rasgos diferentes.

Irritabilidad

Un ser vivo detecta y reacciona a estímulos como la luz, presión, temperatura y/o composición del suelo, aire, agua, etc. Esta reacción es activa (requiere energía), no es pasiva. Por ejemplo, la reacción de una planta al sol es diferente que una piedra que rueda hacia abajo. La planta produce energía para poder crecer hacia el sol (una reacción activa), mientras la piedra no produce ni requiere de energía para rodar, sino que se mueve por la fuerza física de la gravedad.

Evolución

Los seres vivos cambian a través de las generaciones; esto pasa a la escala de una población, no de un individuo. La evolución permite la adaptación de las poblaciones a su ambiente. La Teoría de Evolución es una teoría científica, no una teoría común. Una teoría científica es una explicación de un fenómeno que está apoyada por observaciones científicas. En la ciencia siempre existe la posibilidad de cambiar nuestro entendimiento de nuestro entorno con observaciones futuras y tecnologías que todavía no existen; por eso se llama una teoría. Sin embargo, en palabras comunes una teoría científica es un hecho: es algo que se ha comprobado con las tecnologías actuales y que está aceptado por la comunidad científica.